Angelo Comastri è nato a Sorano (Grosseto), il 17 settembre 1943.
È stato ordinato sacerdote nel 1967. Nel 1990 è stato nominato vescovo di Massa Marittima-Piombino, diocesi che ha lasciato nel 1994 per malattia. Ristabilitosi in salute, il 9 novembre 1996 è stato nominato arcivescovo prelato di Loreto e delegato pontificio per il santuario lauretano. Nel 2005 Giovanni Paolo II lo ha nominato suo vicario generale per la Città del Vaticano, presidente della Fabbrica di San Pietro e coadiutore dell’arciprete della Basilica di San Pietro; nel 2006 Benedetto XVI lo ha nominato arciprete della Basilica di San Pietro. Da Benedetto XVI è stato creato e pubblicato cardinale nel Concistoro del 24 novembre 2007.